1.哪些特定應用使用µ-Slide VI 0.1?
如果實驗中的細胞數量有限(例如當使用原代小鼠細胞時),或者使用最少量的試劑做進行免疫熒光,建議使用µ-Slide VI 0.1?。對于灌注實驗,µ-Slide VI 0.1?會產生-較-高-水-平的剪切應力。
2. µ-Slide內的流型是Y型湍流嗎?
不是,當使用標準流速和水性介質時,在小通道中無法真正實現湍流特性。無量綱雷諾數(Re)用于表征不同的流型。層流發生在低雷諾數,而湍流發生在高雷諾數。表明管道和生物容器中層流的臨界雷諾數是Re=2000。雷諾數超過Re 4000,最有可能代表湍流。即使在 µ-Slide y-shaped中流速非常高(60毫升/分鐘),雷諾數仍非常低,約為Re=200,表明層流。
3.多大的剪切應力適合于滾動和粘附分析?
在滾動和粘附分析中,應該使用與內皮細胞層的標準流動調節相同的參數。有兩件事需要考慮: 首先,在進行滾動和粘附實驗之前,內皮細胞層應該進行幾天的流動調節。這個階段的剪切應力可能不同于在滾動和粘附期間施加的剪切應力。其次,在粘附試驗中,灌注培養基的速度也起作用??赡苄枰淖兗羟袘Α4送?,有必要測試最佳流速/剪切應力。
4.在進行分析之前,應該對細胞層施加多長時間的剪切應力?
細胞對機械剪切應力的適應性反應可長達數天。因此,根據您正在研究的標記,可能有必要在分析前對細胞層進行長達幾天的調節。我們建議在長期實驗中測試感興趣的參數,以確定最佳的測量時間點。
5.應該對內皮細胞施加多大的剪切力?
生理剪切應力取決于感興趣的組織和血管類型。根據文獻,人體內的生理剪切應力值在0至60dyn/cm2之間變化。在開始實驗之前,確定適用于所用細胞類型的相關剪切應力范圍至關重要。
6.如何增加流動分析中的細胞數量?
將通道載玻片串聯到一個灌流裝置/流體單元中,可以輕松地增加流式檢測中細胞的數量。應用說明書25(這是個鏈接2022-07-15發布的公眾號)提供了連接多個通道載玻片到一個流體單元的詳細方案。 此外,將細胞播種到通道底部和頂部,也可以增加通道中的細胞數量。
7.在開始流動之前,細胞應該附著多久?
在流動開始之前,細胞必須緊密附著在通道載玻片底部。附著時間取決于細胞類型、培養基添加物和表面。例如,在膠原涂層表面上使用HUVEC時,附著時間只需半小時。之后,就可以施加剪切應力。為了使細胞有機會適應新的環境條件,建議逐步增加剪切應力。
8.硅珠如何再生?
將硅膠珠加熱即可輕松再生。請按照ibidi泵系統的說明書中的方案進行回收。
9.灌注裝置多久可以重復使用一次?
我們不建議重復使用灌注組件。每次實驗都使用一個新的灌注裝置,可獲得最可復制和較-可-靠的結果。您可以在ibidi泵系統說明書中找到有關滅菌和清潔的其他信息。
11.如何確保細胞獲得孵化后的空氣?
ibidi泵系統的設置確保來自培養箱內部的具有正確CO2濃度的無菌空氣驅動灌注。有關詳細說明,請參見ibidi泵系統的說明書。
12.如何計算通道載玻片中懸浮細胞的剪切應力?
在通道中通過液體時,壁面摩擦會導致流動速度呈拋物線形。通道中心的流速將比壁面快。剪切應力僅在通道或管道的壁面上發生。因此,只有附著在通道壁/底部的細胞才會經歷剪切應力。通道中央的懸浮細胞將經歷不同的流速,與靠近通道壁的細胞不同。因此,對于懸浮細胞,剪切速率是需要考慮的相關因素,而不是剪切應力。